等温核酸増幅アッセイを用いた加工食品中のドンキ皮ゼラチン（）の特異的、高感度かつ迅速な認証

Specific, sensitive and rapid authentication of donkey-hide gelatine () in processed food using an isothermal nucleic acid amplification assay.

• Shyang-Chwen Sheu
• Jhong-Yong Huang
• Yi-Yang Lien
• Meng-Shiou Lee

抄録

ロバ皮ゼラチン（DHG）は、動物由来の伝統的な漢方薬の原料として知られています（中国語では「恵焦」と呼ばれています）。DHGには健康に良い性質があるとされているため、消費量は増加していますが、生産量は減少しています。そのため、DHGの不純化が深刻化しています。本研究では、DHGの認証のためにループ媒介等温増幅（LAMP）法を開発した。DHGからのロバDNAの同定は、LAMPプライマーを用いて1時間以内に特異的かつ迅速に行われました。さらに、LAMPによるDHGの認証感度は10ngであり、従来のPCR法に比べて10倍以上の感度が得られた。相対検出限界は、馬、牛、豚、山羊、羊または鶏由来のゼラチンを含むアジュルタン中の0.1%DHGであった。煮沸または40分間のオートクレーブ処理を含む加熱処理したDHGサンプルから抽出したゲノムDNAをテンプレートとして使用した場合、LAMPによるDHGの検出は変化せず、再現性があった。結論として、本明細書で確立されたLAMPアッセイは、ハーブや食品市場におけるDHGおよびDHG関連製品の認証に適用できる可能性がある。

Donkey-hide gelatine (DHG) is a well-known, animal-derived traditional Chinese medicine material called (known in Chinese as "E'jiao"). Because DHG is claimed to have properties that are beneficial to health, its consumption has increased, but its production has decreased. Thus, the incidence of DHG adulteration has become increasingly serious. In this study, a loop-mediated isothermal amplification (LAMP) assay was developed for the authentication of DHG. Identification of donkey DNA from DHG was performed specifically and rapidly within one hour by LAMP primers. Moreover, the sensitivity of LAMP in authenticating DHG was 10 ng, which revealed a 10-fold higher sensitivity than that of conventional PCR. The relative detection limit was 0.1% DHG in the adulterants, including gelatines of horse, cow, pork, goat, sheep or chicken origins. When genomic DNAs extracted from heat-treated DHG samples, including boiling or autoclaving for 40 min, were used as templates, DHG detection by LAMP was unchanged and reproducible. In conclusion, the LAMP assay established herein could potentially be applied for the authentication of DHG and DHG-related products in herbal or food markets.

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