ジヒドロミリセチンのJAR細胞増殖抑制効果とその作用機序

Inhibitory effect of dihydromyricetin on the proliferation of JAR cells and its mechanism of action.

• Yanzhen Zuo
• Yanjie Lu
• Qian Xu
• Dayong Sun
• Xiujun Liang
• Xiaoru Li
• Yuhong Li

抄録

ジヒドロミリセチン（DMY）は、明らかな毒性を持たずに一部の癌細胞に対して抗腫瘍活性を有する新規の天然薬物である。これまでに、ヒト絨毛がんに対するアポトーシス作用が確認されている。本研究では、新たな絨毛がん治療薬としてのDMYの可能性を検討するとともに、その抗増殖作用と作用機序を明らかにした。JAR細胞の短期的な増殖はMTTアッセイで、長期的な細胞増殖に対するDMYの効果はコロニー形成アッセイで決定した。細胞周期の変化を検出するためにフローサイトメトリーを用いた。さらに、ウエスタンブロット法を用いて、サイクリンＡ１、サイクリンＤ１、ＳＭＡＤ３、ＳＭＡＤ４などの増殖関連タンパク質の発現レベルを検出した。mRNA の発現量を定量するために、逆転写定量 PCR（RT-qPCR）を用いた。その結果、DMYは濃度依存的にJAR細胞の短期および長期増殖を抑制することが示された。フローサイトメトリーではS/G/M細胞周期停止を示し、ウエスタンブロットではSMAD3、SMAD4、サイクリンA1、サイクリンD1の発現レベルが低下していることが明らかになった。RT-qPCRとウエスタンブロットの結果は一致していた。以上の結果から、DMYは、サイクリンA1、サイクリンD1、SMAD3、SMAD4の発現レベルのダウンレギュレーションを介して、細胞周期停止を介して、ヒト絨毛がんJAR細胞の増殖を抑制する可能性が示唆された。

Dihydromyricetin (DMY) is a novel natural drug with antitumor activity against some cancer cells without obvious toxicity. Previously, its apoptotic effect on human choriocarcinoma was detected. The present study further investigated the therapeutic potential of DMY as a new drug for the treatment of choriocarcinoma, as well as its anti-proliferative effect and mechanism of action. The short-term proliferation of JAR cells was determined by MTT assay, whereas the effect of DMY on long-term cell proliferation was determined by colony forming assay. Flow cytometry was used to detect changes in the cell cycle. Furthermore, western blotting was used to detect the expression levels of proliferation-associated proteins such as cyclin A1, cyclin D1, SMAD3 and SMAD4. Reverse transcription-quantitative PCR (RT-qPCR) was used to quantify mRNA expression levels. The results indicated that DMY inhibited short and long-term proliferation of JAR cells in a concentration-dependent manner. Flow cytometry demonstrated S/G/M cell cycle arrest, and western blotting revealed the downregulation of SMAD3, SMAD4, cyclin A1 and cyclin D1 expression levels. The results of RT-qPCR and western blotting were consistent. Overall, the findings of the present study suggest that DMY inhibits the proliferation of human choriocarcinoma JAR cells, potentially through cell cycle arrest via the downregulation of cyclin A1, cyclin D1, SMAD3 and SMAD4 expression levels.

Copyright: © Zuo et al.