LexAベースの酵母二種混合系によるKRIT1タンパク質の同定

Identification of the KRIT1 Protein by LexA-Based Yeast Two-Hybrid System.

• Ilya G Serebriiskii
• Mohamed Elmekawy
• Erica A Golemis

抄録

脳海綿体奇形（CCM）は、中枢神経系の血管奇形であり、毛細血管の漏れを伴い、脳内出血や発作を含む重篤な臨床状態になりやすい。CCM1/KRIT1遺伝子の生殖細胞変異または散発的変異がCCMの大多数の症例の原因となっている。この論文では、CCM1/KRIT1遺伝子のオリジナルの特徴について述べる。このクローニングは、RASファミリーGTPase KREV1/RAP1Aをベイトとして使用して、相互作用トラップとして知られている酵母2ハイブリッドスクリーンのバリアントを使用して行われた。最初に同定されたKRIT1（Krev1 Interaction Trapped）の部分クローンを、5'RACEおよび計算解析を介して拡張して全長cDNAを得、その後、シークエンススクリーンで使用して、インテグリン関連ICAP1タンパク質をKRIT1パートナータンパク質として定義した。これらの相互作用がKRIT1/CCM1生物学の現在の理解にどのように関連しているかを議論し、インターアクショントラップを用いたライブラリースクリーニングのためのプロトコルを提供する。

Cerebral cavernous malformation (CCM) is a vascular malformation of the central nervous system that is associated with leaky capillaries, and a predisposition to serious clinical conditions including intracerebral hemorrhage and seizures. Germline or sporadic mutations in the CCM1/KRIT1 gene are responsible for the majority of cases of CCM. In this article, we describe the original characterization of the CCM1/KRIT1 gene. This cloning was done through the use of a variant of the yeast two-hybrid screen known as the interaction trap, using the RAS-family GTPase KREV1/RAP1A as a bait. The partial clone of KRIT1 (Krev1 Interaction Trapped) initially identified was extended through 5'RACE and computational analysis to obtain a full-length cDNA, then used in a sequential screen to define the integrin-associated ICAP1 protein as a KRIT1 partner protein. We discuss how these interactions are relevant to the current understanding of KRIT1/CCM1 biology, and provide a protocol for library screening with the Interaction Trap.