ニホンウズラの脈絡膜モデルを用いたレプチンと高分子・低分子ヘパリンの外用による血管新生のモジュレーション

Modulation of angiogenesis by topical application of leptin and high and low molecular heparin using the Japanese quail chorioallantoic membrane model.

• M Macajova
• I Cavarga
• M Sykorova
• M Valachovic
• V Novotna
• B Bilcik

抄録

制御不能な血管の成長を特徴とする病的な血管新生は、多くの疾患の特徴である。鳥類胚の絨毛足底膜（CAM）は、血管新生研究のための優れたモデルである。我々の研究では、我々はレプチン、高分子（ヘパリンナトリウム）と低分子（ナドロパリンカルシウム）ヘパリンの血管新生の可能性をテストするために、あまり一般的ではないニホンウズラのCAMモデルを使用しています。ヘパリンは、血管内皮細胞機能に重要な役割を果たし、彼らは、血管新生増殖因子の活性を調節することができます。胚発生7日目にレプチン（5μg/CAM）、ヘパリンナトリウム（75IU/CAM）およびナドロパリンカルシウム（47.5IU/CAM）を500μl PBS中でCAM表面に塗布した。24時間後に血管系のフラクタル次元（Df）を評価した。各群のサンプルを組織学的に解析し、qPCRで発現を検出した。Dfはレプチン投与群で有意に増加した。ヘパリンナトリウムの適度な刺激効果とナドロパリンカルシウムの抑制効果が認められた。また，レプチン，ヘパリンナトリウムともに，対照群，ナドロパリンカルシウム群と比較して，CAMの厚みが顕著に増加した．血管数の増加や線維芽細胞の蓄積が観察された。処置後および24h後の遺伝子発現には有意な影響はなかったが、DfおよびCAM厚さの変化と同様の傾向が認められた。その結果、レベルに対するナドロパリン投与の効果は、レプチン投与の効果とは正反対であった（<0.05）。

Pathological angiogenesis characterized by uncontrollable vessel growth is an accompanying feature of many diseases. The avian embryo chorioallantoic membrane (CAM) is an excellent model for angiogenesis research. In our study we used a less common Japanese quail CAM model for the testing of angiogenic potential of leptin, high-molecular (heparin sodium) andlow-molecular (nadroparin calcium) heparins. Heparins play a significant role in vascular endothelial cell function, and they are able to modulate the activities of angiogenic growth factors. On embryonic day 7 leptin (5 μg per CAM), heparin sodium (75 IU per CAM) and nadroparin calcium (47.5 IU per CAM) in 500 μl PBS were applied on the CAM surface. After 24 h the fractal dimension (Df) of the vasculature was evaluated. Samples from each group were histologically analyzed and and expression were detected by qPCR. Df was significantly increased in the leptin group. A moderate stimulatory effect of heparin sodium and an inhibitory effect of nadroparin calcium were observed. Both leptin and heparin sodium caused a noticeable increase in the CAM thickness compared to the control and nadroparin calcium groups. We observed an increased number of blood vessels and accumulation of fibroblasts. There was no significant impact on gene expression of and 24 h after treatment, however, trends similar to the changes in Df and CAM thickness were present. The resulting effect of nadroparin administration on levels was exactly the opposite to that of leptin ( < 0.05).

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