小児の気管支肺胞ラバージュの単一細胞フローサイトメトリープロファイリング

Single Cell Flow Cytometry Profiling of Bronchoalveolar Lavage in Children.

• Shivanthan Shanthikumar
• Matthew Burton
• Richard Saffery
• Sarath C Ranganathan
• Melanie R Neeland

抄録

小児肺疾患は小児期の罹患率や死亡率を引き起こすだけでなく、長期的な肺機能障害を引き起こす可能性がある。多くの小児肺疾患の臨床管理は、基礎となる病態生理学的メカニズムの理解が不十分なために妨げられている。フローサイトメトリーは、個々の細胞集団の表現型を決定したり、下流での分析のために細胞を分離したりするために使用することができ、これらの疾患の病態生理を解明するのに役立つ重要な技術である。ここでは、小児の気管支肺胞ラバージ（BAL）中の細胞集団の精製と特徴付けのためのフローサイトメトリーをベースとした方法について述べる。これには、細胞の表現型と頻度に対する凍結保存の効果の評価が含まれていますが、最近、肺サンプルのフローサイトメトリーに関する米国胸部学会の報告書によって特定された知識のギャップがあります。私たちの知る限りでは、これは同時に肺胞マクロファージ、T細胞（CD4とCD8）、B細胞、NK細胞、樹状細胞、顆粒球と単球（CD16 + / CD16-）を定量化するための最初の研究である子供のBAL。記載されているプロトコルは、小児肺疾患の病態生理の調査を進めるために使用することができます。

Childhood pulmonary diseases not only cause childhood morbidity and mortality, but can also cause long term pulmonary impairment. The clinical management of many childhood pulmonary diseases is hampered by a limited understanding of the underlying pathophysiological mechanisms. Flow cytometry, which can be used to phenotype individual cell populations or isolate cells for downstream analysis, represents a crucial technology which can help to elucidate the pathophysiology of these conditions. Here, we describe a flow cytometry-based method for purification and characterisation of cell populations in bronchoalveolar lavage (BAL) from children. This includes assessment of the effect of cryopreservation on cell phenotype and frequency, a knowledge gap recently identified by an American Thoracic Society report on flow cytometry in lung samples. To our knowledge, this is the first study to simultaneously quantify alveolar macrophages, T cells (CD4 and CD8), B cells, NK cells, dendritic cells, granulocytes and monocytes (CD16+/CD16-) in the BAL of children. The protocols described can be used to advance investigation of the pathophysiology of childhood pulmonary diseases.