2-アミノエトキシジフェニルボレート（2-APB）は、血小板からのホスファチジルセリン暴露細胞外小胞の放出を阻害する

2-Aminoethoxydiphenylborate (2-APB) inhibits release of phosphatidylserine-exposing extracellular vesicles from platelets.

• Hao Wei
• Jessica E Davies
• Matthew T Harper

抄録

活性化した血小板は、Caやカルパインに依存した方法で細胞外小胞（EV）を表面からホスファチジルセリン（PS）を放出します。これらのホスファチジルセリン暴露EVは血栓性および炎症性であり、多くの心血管疾患や代謝性疾患で高レベルで見られます。PS曝露EVがどのようにして排出されるかは完全には理解されていない。このプロセスをより明確に理解することで、放出を選択的にブロックする薬剤の開発に役立つ可能性がある。本研究では、2-アミノエトキシジフェニルボレート（2-APB）がCaイオノフォア、A23187、または気孔形成毒素、ストレプトリジン-Oで刺激された血小板からのPS暴露EVの放出を有意に阻害することを報告する。2-APBの2つの類似体であるジフェニルボロン酸無水物(DPBA)と3-(ジフェニルホスフィノ)-1-プロピルアミン(DP3A)は、同様の効力でPS暴露EV放出を阻害した。2-APBとDPBAは血小板のPS曝露とカルパイン活性を弱く阻害したが、DP3AではPS曝露EV放出を阻害したにもかかわらず、これは認められなかった。これらのデータは、PS曝露EV放出に必要な細胞質Caシグナル、PS曝露、カルパイン活性とは独立した2-APBのさらなる標的があることを示唆している。DP3Aは、これらの他の効果を伴わずに、同じ標的を阻害する可能性が高い。2-APB、DPBA、DP3Aの標的を特定することは、活性化された血小板からのPS曝露EV放出を阻害し、血栓症や炎症への寄与を抑制する新たな方法を提供する可能性がある。

Activated, procoagulant platelets shed phosphatidylserine (PS)-exposing extracellular vesicles (EVs) from their surface in a Ca- and calpain-dependent manner. These PS-exposing EVs are prothrombotic and proinflammatory and are found at elevated levels in many cardiovascular and metabolic diseases. How PS-exposing EVs are shed is not fully understood. A clearer understanding of this process may aid the development of drugs to selectively block their release. In this study we report that 2-aminoethoxydiphenylborate (2-APB) significantly inhibits the release of PS-exposing EVs from platelets stimulated with the Ca ionophore, A23187, or the pore-forming toxin, streptolysin-O. Two analogues of 2-APB, diphenylboronic anhydride (DPBA) and 3-(diphenylphosphino)-1-propylamine (DP3A), inhibited PS-exposing EV release with similar potency. Although 2-APB and DPBA weakly inhibited platelet PS exposure and calpain activity, this was not seen with DP3A despite inhibiting PS-exposing EV release. These data suggest that there is a further target of 2-APB, independent of cytosolic Ca signalling, PS exposure and calpain activity, that is required for PS-exposing EV release. DP3A is likely to inhibit the same target, without these other effects. Identifying the target of 2-APB, DPBA and DP3A may provide a new way to inhibit PS-exposing EV release from activated platelets and inhibit their contribution to thrombosis and inflammation.

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