組換え発現ホストからRNAエクソソーム複合体を生成するための戦略

Strategies for Generating RNA Exosome Complexes from Recombinant Expression Hosts.

• Eva-Maria Weick
• John C Zinder
• Christopher D Lima

抄録

真核生物のRNAエキソソームは、複数のRNase活性を持ち、多様なRNA分解・処理イベントに関与する、保存状態の良いユビキタスな多タンパク質複合体である。RNAエキソソームの機能に関する現在の理解の多くは、遺伝学や細胞生物学に基づくタンパク質機能の研究、特にS. cerevisiaeにおける研究によって解明されてきたが、この分野における多くの重要な貢献は、in vitroで再構成された複合体の使用によって可能になってきた。ここでは、組換え源からエキソソーム成分を精製し、機能的な複合体に再構成するためのアプローチの概要を紹介する。この概要に続く3つの章では、S. cerevisiae、S. pombe、およびH. sapiensからエクソソーム複合体を再構成するための詳細なプロトコルを提供します。さらに、これらの方法の欠点のいくつかについての洞察を提供し、再構成複合体を使用して達成されたいくつかの重要な発見を強調しています。

The eukaryotic RNA exosome is a conserved and ubiquitous multiprotein complex that possesses multiple RNase activities and is involved in a diverse array of RNA degradation and processing events. While much of our current understanding of RNA exosome function has been elucidated using genetics and cell biology based studies of protein functions, in particular in S. cerevisiae, many important contributions in the field have been enabled through use of in vitro reconstituted complexes. Here, we present an overview of our approach to purify exosome components from recombinant sources and reconstitute them into functional complexes. Three chapters following this overview provide detailed protocols for reconstituting exosome complexes from S. cerevisiae, S. pombe, and H. sapiens. We additionally provide insight on some of the drawbacks of these methods and highlight several important discoveries that have been achieved using reconstituted complexes.