光刺激を受けたザリガニの光受容体の感作性低下と回復

Desensitization and Recovery of Crayfish Photoreceptors Upon Delivery of a Light Stimulus.

• Carolina Barriga-Montoya
• Araceli de la O-Martínez
• Arturo Picones
• Arturo Hernández-Cruz
• Beatriz Fuentes-Pardo
• Froylán Gómez-Lagunas

抄録

ザリガニの光受容体の脱感作と回復を研究する方法を紹介します。我々は、不連続単一電極スイッチ電圧クランプ構成を使用して単離された眼幹の感光細胞の細胞内電気記録を行った。最初に、剃刀で我々 は網膜へのアクセスを得るために背側角膜に開口部を作った。その後、我々は、開口部を介してガラス電極を挿入し、負の電位の記録によって報告されたように細胞を貫通した。膜電位を光受容体の安静時電位でクランプし、光パルスを印加して電流を活性化した。最後に、電流の脱感作と回復を測定するために、2回の光点滅プロトコルを採用した。1回目の光照射では、遅延期間の後に伝導性イオン電流が誘発され、ピーク振幅に達した後、脱感作状態に向かって減衰します。光励起電流を特徴づけるために、3つのパラメータを測定しました：1）レイテンシー（光フラッシュが照射されてから電流が最大値の10％に達するまでの経過時間）、2）ピーク電流、および3）脱感作時定数（電流の減衰段階の指数時定数）。すべてのパラメータは最初のパルスの影響を受けます。脱感作からの回復を定量化するために、パルス間の時間に対する比p2/p1を採用した。p1は最初の光パルスによって誘発されたピーク電流であり、p2は2番目のパルスによって誘発されたピーク電流である。これらのデータは、指数関数の和に適合させた。最後に、これらの測定を概日時間の関数として実施した。

A method to study desensitization and recovery of crayfish photoreceptors is presented. We performed intracellular electrical recordings of photoreceptor cells in isolated eyestalks using the discontinuous single electrode-switched voltage-clamp configuration. First, with a razor blade we made an opening in the dorsal cornea to get access to the retina. Thereafter, we inserted a glass electrode through the opening, and penetrated a cell as reported by the recording of a negative potential. Membrane potential was clamped at the photoreceptor's resting potential and a light-pulse was applied to activate currents. Finally, the two light-flash protocol was employed to measure current desensitization and recovery. The first light-flash triggers, after a lag period, the transduction ionic current, which after reaching a peak amplitude decays towards a desensitized state; the second flash, applied at varying time intervals, assesses the state of the light-activated conductance. To characterize the light-elicited current, three parameters were measured: 1) latency (the time elapsed between light flash delivery and the moment in which current achieves 10% of its maximum value); 2) peak current; and 3) desensitization time constant (exponential time constant of the current decay phase). All parameters are affected by the first pulse. To quantify recovery from desensitization, the ratio p2/p1 was employed versus time between pulses. p1 is the peak current evoked by the first light-pulse, and p2 is the peak current evoked by the second pulse. These data were fitted to a sum of exponential functions. Finally, these measurements were carried out as function of circadian time.