PD-1/PD-L1免疫チェックポイントの相互作用を阻害するアフィボディのスクリーニングと製造

Screening and production of an affibody inhibiting the interaction of the PD-1/PD-L1 immune checkpoint.

• Lei Jing
• Juanjuan Liu
• Dongxu Cui
• Yuyin Li
• Zhenxing Liu
• Li Tao
• Qing Zhao
• Aipo Diao

抄録

アフィボディは、ブドウ球菌タンパク質AのZドメインに由来する58アミノ酸ペプチドであり、一般的に画像診断、臨床治療、バイオテクノロジー研究などの分野に応用されています。免疫チェックポイントPD-L1を標的とするアフィボディをスクリーニングするために、変性オーバーラップPCRプライマーとIn-fusion技術を用いて、酵母中でコンビナトリアルアフィボディライブラリーを生成した。PD-L1のIg様Vドメインを標的とするZ-j1およびZ-j2アフィボディをスクリーニングし、このコンビナトリアルアフィボディライブラリーから酵母2ハイブリッドシステムを用いて同定した。Z-j1およびZ-j2組換えアフィボディタンパク質は、大腸菌で過剰に産生され、精製された。その結果、Z-j1およびZ-j2組換えアフィボディはPD-L1と高い親和性を示し、PD-1/PD-L1の相互作用を阻害することが明らかになった。このように、免疫チェックポイントであるPD-1/PD-L1を標的とした新規アフィボディが同定・作製され、がん免疫療法への応用が期待されています。

An affibody is a 58 amino acids peptide derived from the Z domain of staphylococcal protein A and generally applied in areas such as imaging diagnosis, clinical therapeutics and biotechnology research. To screen for an affibody targeting the immune checkpoint PD-L1, a combinatorial affibody library was generated in yeast using degenerate overlap PCR primers and In-fusion technology. Z-j1 and Z-j2 affibodies targeting the Ig-like V domain of PD-L1 were screened and identified from this combinatorial library using the yeast two hybrid system. The Z-j1 and Z-j2 recombinant affibody proteins were over produced in E.coli and purified. ELISA and GST pull-down assays showed that recombinant Z-j1 and Z-j2 affibody proteins bound with high affinity to PD-L1 and inhibited the interaction of PD-1/PD-L1. Thus, novel affibodies targeting the immune checkpoint PD-1/PD-L1 were identified and produced in this study and have the potential to be used in cancer immunotherapy.

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