EPS8/ABI1/SOS1トリコンプレックスを標的とした阻害性ショートペプチドは、卵巣癌細胞の浸潤と転移を抑制する

Inhibitory short peptides targeting EPS8/ABI1/SOS1 tri-complex suppress invasion and metastasis of ovarian cancer cells.

• Xuechen Yu
• Chuan Liang
• Yuanzhen Zhang
• Wei Zhang
• Huijun Chen

抄録

背景:

卵巣がんの転移に不可欠なキーコンポーネントであるSOS1/EPS8/ABI1トリコンプレックスのタンパク質相互作用を阻害することができる阻害性ショートペプチドの開発を目指しました。

BACKGROUND: We aimed to develop inhibitory short peptides that can prevent protein interactions of SOS1/EPS8/ABI1 tri-complex, a key component essential for ovarian cancer metastasis.

方法:

HA タグ付き ABI1 の様々な領域を含むプラスミドを、フラグタグ付き SOS1 または Myc タグ付き EPS8 と卵巣癌細胞に共導入した。共免疫沈降法とGST-プルダウンアッセイを用いて、SOS1とEPS8の結合に関与するABI1の領域を同定した。これらの結合領域の阻害性ショートペプチドを合成し、HIV-TAT配列で修飾した。これらのペプチドのABI1-SOS1またはABI1-EPS8相互作用に対する阻害効果は、in vitroおよびin vivoでGST-プルダウンアッセイによって決定された。これらの短いペプチドの卵巣癌細胞の浸潤と転移を阻害する能力は、Matrigel浸潤アッセイおよび腹膜転移性コロニー化アッセイによって試験された。

METHODS: Plasmids containing various regions of HA-tagged ABI1 were co-transfected into ovarian cancer cells with Flag-tagged SOS1 or Myc-tagged EPS8. Co-immunoprecipitation and GST-pulldown assay were used to identify the regions of ABI1 responsible for SOS1 and EPS8 binding. Inhibitory short peptides of these binding regions were synthesized and modified with HIV-TAT sequence. The blocking effects of the peptides on ABI1-SOS1 or ABI1-EPS8 interactions in vitro and in vivo were determined by GST-pulldown assay. The capability of these short peptides in inhibiting invasion and metastasis of ovarian cancer cell was tested by Matrigel invasion assay and peritoneal metastatic colonization assay.

結果:

LPA 誘導卵巣癌細胞浸潤において、内因性 SOS1/EPS8/ABI1 のトリコンプレックスの形成が検出された。ABI1はSOS1とEPS8を保持する足場タンパク質として機能していた。ABI1のSH3領域とポリプロリン+PxxDY領域はそれぞれSOS1とEPS8の結合に関与していた。阻害性の短いペプチドp+p-8（pppppppppvdyedee）とSH3-3（ekvvaiydytkdkddelsfmegaii）は、ABI1-SOS1とABI1-EPS8の相互作用をin vitroでブロックすることができた。TAT-p+p-8ペプチドは、ABI1-EPS8相互作用を阻害し、卵巣癌細胞の浸潤と転移を抑制することができました。

RESULTS: The formation of endogenous SOS1/EPS8/ABI1 tri-complex was detected in the event of LPA-induced ovarian cancer cell invasion. In the tri-complex, ABI1 acted as a scaffold protein holding together SOS1 and EPS8. The SH3 and poly-proline+PxxDY regions of ABI1 were responsible for SOS1 and EPS8 binding, respectively. Inhibitory short peptides p + p-8 (ppppppppvdyedee) and SH3-3 (ekvvaiydytkdkddelsfmegaii) could block ABI1-SOS1 and ABI1-EPS8 interaction in vitro. TAT-p + p-8 peptide could disrupt ABI1-EPS8 interaction and suppress the invasion and metastasis of ovarian cancer cells in vivo.

結論:

TAT-p+p-8ペプチドは、ABI1-EPS8相互作用、トリコンプレックス形成を効率的に阻害し、卵巣癌細胞の浸潤・転移を阻害することができた。

CONCLUSIONS: TAT-p + p-8 peptide could efficiently disrupt the ABI1-EPS8 interaction, tri-complex formation, and block the invasion and metastasis of ovarian cancer cells.