オールトランスレチノイン酸は血小板機能と血栓形成に障害を与え、プロテインキナーゼCßI/δリン酸化を阻害する

All-Trans Retinoic Acid Impairs Platelet Function and Thrombus Formation and Inhibits Protein Kinase CßI/δ Phosphorylation.

• Qi Luo
• Guangyu Wei
• Xiamin Wang
• Xiaoqi Xu
• Wen Ju
• Zhenyu Li
• Elizabeth E Gardiner
• Robert K Andrews
• Lingyu Zeng
• Kailin Xu
• Jianlin Qiao

抄録

全トランスレチノイン酸（ATRA）は、急性前骨髄球性白血病（APL）患者の完全寛解の誘導に広く使用されている。ATRAはまた、プロテインキナーゼC（PKC）活性を調節します。ATRAの使用により、APL患者さんの止血機能が阻害されることが報告されていますが、血小板への影響は明らかになっていません。本研究では、治療に適した用量のATRAが血小板機能に及ぼす影響を検討することを目的としている。ヒト血小板をATRA（0-20μM）で37℃で1時間プレインキュベートした後、フローサイトメトリーによる凝集、顆粒分泌、受容体発現、血小板の拡がり、または血栓退縮の解析を行った。さらに、マウスにATRA（10mg/kg）を腹腔内注射し、尾部出血時間と動脈血栓形成を評価した。ATRAは、コラーゲン（5μg/mL）またはトロンビン（0.05 U/mL）によって誘導される血小板凝集およびアデノシン三リン酸遊離を用量依存的に抑制したが、P-セレクチン発現や糖タンパク質（GP）Ibα、GPVI、またはαβの表面レベルには影響を与えなかった。ATRA処理した血小板は、固定化されたフィブリノーゲンやコラーゲン上での広がりが減少し、トロンビン誘発性の血栓退縮が減少し、SykおよびPLCγ2のリン酸化も減少した。 さらに、ATRA処理したマウスは、生体内での止血および動脈血栓形成が著しく阻害されていた。さらに、コラーゲン関連ペプチドまたはトロンビンで刺激した血小板において、ATRAはPKCßI（Ser661）およびPKCδ（Thr505）のリン酸化を選択的に阻害しましたが、PKCαおよびPKCßIIのリン酸化（Thr638/641）は阻害しませんでした。結論として、ATRAは血小板機能および血栓形成を阻害し、PKCßI/δの直接的または間接的な阻害が関与している可能性があり、ATRAは血栓性疾患または心血管疾患の治療に有用である可能性が示唆された。

All-trans retinoic acid (ATRA) is widely used for induction of complete remission in patients with acute promyelocytic leukemia (APL). ATRA also regulates protein kinase C (PKC) activity. Therapeutic use of ATRA reportedly interferes with hemostatic function in APL patients, including effects on coagulation or other vascular cells, although effects of ATRA on platelets remain unclear. This study aims to investigate the effect of therapeutic-relevant doses of ATRA on platelet function. Human platelets were preincubated with ATRA (0-20 μM) for 1 hour at 37°C, followed by analysis of aggregation, granule secretion, receptor expression by flow cytometry, platelet spreading, or clot retraction. Additionally, ATRA (10 mg/kg) was injected intraperitoneally into mice and tail bleeding time and arterial thrombus formation were evaluated. ATRA inhibited platelet aggregation and adenosine triphosphate release induced by collagen (5 μg/mL) or thrombin (0.05 U/mL) in a dose-dependent manner without affecting P-selectin expression or surface levels of glycoprotein (GP) Ibα, GPVI, or αβ. ATRA-treated platelets demonstrated reduced spreading on immobilized fibrinogen or collagen and reduced thrombin-induced clot retraction together with reduced phosphorylation of Syk and PLCγ2. In addition, ATRA-treated mice displayed significantly impaired hemostasis and arterial thrombus formation in vivo. Further, in platelets stimulated with either collagen-related peptide or thrombin, ATRA selectively inhibited phosphorylation of PKCßI (Ser661) and PKCδ (Thr505), but not PKCα or PKCßII phosphorylation (Thr638/641). In conclusion, ATRA inhibits platelet function and thrombus formation, possibly involving direct or indirect inhibition of PKCßI/δ, indicating that ATRA might be beneficial for the treatment of thrombotic or cardiovascular diseases.

Georg Thieme Verlag KG Stuttgart · New York.