モノクローナル抗体 AC10364 は、アポトーシス経路を介して 5-FU 耐性肝細胞癌の細胞増殖を抑制する

Monoclonal antibody AC10364 inhibits cell proliferation in 5-fluorouracil resistant hepatocellular carcinoma via apoptotic pathways.

• Jianzhong Wu
• Junwei Qu
• Haixia Cao
• Changwen Jing
• Zhuo Wang
• Heng Xu
• Rong Ma

抄録

背景:

本研究では、mAb（AC10364）の抗腫瘍活性をin vitroで検討し、AC10364で処理したbel/fu細胞を用いて細胞増殖阻害のメカニズムを明らかにすることを目的とした。

Background: This study was designed to investigate the antitumor activity of the mAb (AC10364) in vitro and elucidate the related mechanisms of inhibition to cell growth using bel/fu cells treated with AC10364.

方法:

Bel/fu 細胞の増殖に対する AC10364 の抑制効果を細胞毒性アッセイを用いて調べた。Bel/fu 細胞のアポトーシスは、AC10364 を 24 時間投与した後、FITC annexin V および PI 染色を用いて検出した。アポトーシスを調節する因子は、AC10364を0、12、24、36時間処理したBel/fu細胞の溶解物を用いたウエスタンブロットにより同定した。腫瘍形成または増殖に関連する遺伝子を、AC10364で12、24または36時間処理したBel/fu細胞を用いた逆転写-定量的ポリメラーゼ連鎖反応により解析した。

Methods: The inhibitory effects of AC10364 on the proliferation of Bel/fu cells were examined using a cytotoxicity assay. Apoptosis of Bel/fu cells was detected using FITC annexin V and PI staining following treatment with AC10364 for 24 h. The factors regulating apoptosis were identified by Western blot using lysates of Bel/fu cells treated with AC10364 for 0, 12, 24, or 36 h. Genes associated with tumorigenesis or growth were analyzed by reverse transcription-quantitative polymerase chain reaction using Bel/fu cells treated for 12, 24, or 36 h with AC10364.

結果:

AC10364で処理したBel/fu細胞の初期アポトーシス比は用量依存的に増加した。AC10364で処理したBel/fu細胞では、切断されたカスパーゼ-3、カスパーゼ-3およびカスパーゼ-9を含むカスパーゼのレベルが有意に高かった（<0.001）。また、AC10364を投与した細胞では、未処理細胞と比較して、結合タンパク質遺伝子（Gタンパク質サブユニットα）の発現が有意に低下していた。15, GNA15）およびその他のタンパク質コード遺伝子（fms-related tyrosine kinase 1(FLT1)、ニコチンアミドホスホリボシルトランスフェラーゼ(NAMPT)、ネットリン 4(NTN4)、血小板由来成長因子サブユニット A(PDGFA)、S100 カルシウム結合タンパク質 A11(S100A11)、チューブリン βなど）の発現を有意に低下させた。3クラスIII（TUBB3）、アルドケト還元酵素ファミリー1メンバーC3（AKR1C3）、内皮PASドメインプロテイン1（EPAS1）、およびインターフェロンα誘導性プロテイン27（IFI27）（<0.001).他の2つの遺伝子、AXL受容体チロシンキナーゼ（AXL）とカルボキシペプチダーゼA4（CPA4）は、有意にアップレギュレーションされていた（<0.001）。

Results: The early apoptotic ratios of Bel/fu cells treated with AC10364 increased in a dose-dependent manner. The levels of caspases, including cleaved caspase-3, caspase-3 and caspase-9, were significantly high in Bel/fu cells treated with AC10364 (<0.001). Compared with untreated cells, those exposed to AC10364 had showed significant downregulation of the expression of binding protein gene (G protein subunit α 15, GNA15) and other protein-coding genes, including fms-related tyrosine kinase 1(FLT1), nicotinamide phosphoribosyltransferase (NAMPT), netrin 4 (NTN4), platelet-derived growth factor subunit A (PDGFA), S100 calcium binding protein A11 (S100A11), tubulin β 3 class III (TUBB3), aldo-keto reductase family 1 member C3 (AKR1C3), endothelial PAS domain protein 1 (EPAS1), and interferon α-inducible protein 27 (IFI27) (<0.001). Two other genes, AXL receptor tyrosine kinase (AXL) and carboxypeptidase A4 (CPA4), were significantly upregulated (<0.001).

結論:

AC10364は、腫瘍形成や増殖に関連する複数の遺伝子の発現異常を介して細胞の生存率や増殖を阻害し、これらの遺伝子ががん治療の有力な候補となる可能性が示唆された。

Conclusion: AC10364 inhibited cell viability and proliferation through aberrant expression of multiple genes associated with tumorigenesis or growth, which suggests that these genes may be promising therapeutic candidates for cancer therapy.