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RPGR欠損Rd9マウスにおけるコドン最適化RPGRを発現するAAVベクターの毒性と薬理学
Toxicology and Pharmacology of an AAV Vector Expressing Codon-Optimized RPGR in RPGR-Deficient Rd9 Mice.
PMID: 30280954 PMCID: PMC6421992. DOI: 10.1089/humc.2018.168.
抄録
Applied Genetic Technologies Corporation (AGTC) は、網膜色素変性 GTPase Regulator (RPGR) 遺伝子に変異がある患者の網膜色素変性症 (RP) を治療するために、組換えアデノ随伴ウイルス (rAAV) ベクター AGTC-501 (AAV2tYF-GRK1-RPGRco とも呼ばれる) を開発しています。ベクターは、光受容体特異的プロモーター（G タンパク質共役型受容体キナーゼ 1、GRK1）によって駆動されるコドン最適化されたヒト RPGR cDNA（RPGRco）を含み、3 つの表面チロシン残基をフェニルアラニンに変化させた AAV2 キャプシド（AAV2tYF）にパッケージ化されています。自然発生型RPGR欠損Rd9マウスモデルを用いて、このベクターを網膜下注射で投与した場合の安全性および効力試験を行った。60匹のRd9マウス（各群20匹）に、ビヒクル（コントロール）またはAAV2tYF-GRK1-RPGRcoの右眼に、2つの用量レベル（4×10または4×10 vg/眼）のいずれかで網膜下注射を行い、注射後12週間追跡した。ベクター注射は、全身毒性を伴わず、忍容性が良好であった。高ベクター投与群では、統計的に有意ではないが、網膜電図のb波振幅が減少する傾向があった。血液学的または臨床化学的パラメータに臨床的に重要な変化は認められず、ベクターに関連した生活や組織学的検査による眼の変化も認められなかった。投与量に依存したRPGRタンパク質の発現は、主に光受容体の内側のセグメントおよび隣接する接続する繊毛領域で観察され、検査したすべてのベクター処理眼で観察された。コドン最適化されたＲＰＧＲの配列完全性は、ベクター処理した網膜組織から抽出した総ＲＮＡからＰＣＲ増幅したＤＮＡまたはｃＤＮＡを逆転写したものの配列決定、およびトランスフェクトしたＨＥＫ２９３細胞から得られたＲＰＧＲタンパク質の配列決定によって確認された。これらの結果は、RPGR変異に起因するXLRP患者の臨床研究におけるrAAV2tYF-GRK1-RPGRcoの使用を支持するものである。
Applied Genetic Technologies Corporation (AGTC) is developing a recombinant adeno-associated virus (rAAV) vector AGTC-501, also designated AAV2tYF-GRK1-RPGRco, to treat retinitis pigmentosa (RP) in patients with mutations in the retinitis pigmentosa GTPase regulator (RPGR) gene. The vector contains a codon-optimized human RPGR cDNA (RPGRco) driven by a photoreceptor-specific promoter (G protein-coupled receptor kinase 1, GRK1) and is packaged in an AAV2 capsid with three surface tyrosine residues changed to phenylalanine (AAV2tYF). We conducted a safety and potency study of this vector administered by subretinal a injection in the naturally occurring RPGR-deficient Rd9 mouse model. Sixty Rd9 mice (20 per group) received a subretinal injection in the right eye of vehicle (control) or AAV2tYF-GRK1-RPGRco at one of two dose levels (4 × 10 or 4 × 10 vg/eye) and were followed for 12 weeks after injection. Vector injections were well tolerated, with no systemic toxicity. There was a trend towards reduced electroretinography b-wave amplitudes in the high vector dose group that was not statistically significant. There were no clinically important changes in hematology or clinical chemistry parameters and no vector-related ocular changes in life or by histological examination. Dose-dependent RPGR protein expression, mainly in the inner segment of photoreceptors and the adjacent connecting cilium region, was observed in all vector-treated eyes examined. Sequence integrity of the codon-optimized RPGR was confirmed by sequencing of PCR-amplified DNA, or cDNA reverse transcribed from total RNA extracted from vector-treated retinal tissues, and by sequencing of RPGR protein obtained from transfected HEK 293 cells. These results support the use of rAAV2tYF-GRK1-RPGRco in clinical studies in patients with XLRP caused by RPGR mutations.