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組換えスパイク蛋白質を用いた豚伝染性下痢ウイルスに対する抗体検出のための間接ELISA法の開発と応用
Development and application of an indirect ELISA for the detection of antibodies to porcine epidemic diarrhea virus based on a recombinant spike protein.
PMID: 30126390 PMCID: PMC6102851. DOI: 10.1186/s12917-018-1570-5.
抄録
背景:
豚ウイルス性下痢症の主な原因菌である豚伝染性下痢ウイルス（PEDV）は、養豚国の経済に多大な損失をもたらしている。そのため、PEDVを間接的に診断して病気をコントロールするためには、対応する抗体を血清学的に検出することが有効であると考えられます。本研究では，PEDV の組換えスパイク（S）タンパク質を用いた間接酵素連結免疫吸着法（ELISA）を開発し，その有効性を検証した．
BACKGROUND: As the major causative agent of swine viral diarrhea, porcine epidemic diarrhea virus (PEDV) has caused massive losses to the economies of swine raising countries. Accordingly, the serological detection of corresponding antibodies would be beneficial to diagnose PEDV indirectly to control the disease. In this study, an indirect enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) based on the recombinant truncated spike (S) protein of PEDV was developed and validated.
結果:
開発した間接免疫測定法の反応条件を最適化した。この間接 ELISA 法を間接免疫蛍光測定法（IFA）と比較した結果，PEDV 抗体価の異なる 368 例の臨床血清を測定した結果，全体の一致率は 96.74%であった．また，開発した S1 間接免疫測定法では，他の一般的な豚病原体との交差反応性は検出されませんでした．最後に，S1間接ELISAを用いて中国東部の養豚場から採取した3304検体の血清抗体を検出したところ，PEDVの感染状況については全体的に有意な一致が得られた．
RESULTS: The reaction conditions of the developed indirect ELISA were optimized. This indirect ELISA was compared to indirect immunoinfluscent assay (IFA), and the overall coincidence rate was 96.74% based on testing 368 clinical serum samples with different PEDV antibody levels. No cross-reactivity with other common swine pathogens was detected for the developed S1 indirect ELISA. Finally, the S1 indirect ELISA was applied to detect serum antibodies of 3304 field samples collected from different pig farms in eastern China, and it presented an overall substantial agreement on the PEDV infection status.
結論:
本法はPEDVに対する血清抗体を検出することが可能であり，感度・特異度が高いため，血清学的評価やPEDV感染症の間接診断に応用可能である．
CONCLUSIONS: This established S1 indirect ELISA is capable of detecting serum antibodies against PEDV, and due to its high sensitivity and specificity, it could be applied for serological evaluation and indirect diagnosis of PEDV infection.