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Diagn Pathol.2014 Mar;9:65. 1746-1596-9-65. doi: 10.1186/1746-1596-9-65.Epub 2014-03-20.

メルケル細胞ポリオマウイルス（MCPyV）の小型T抗原発現を検出するための新規抗体を用いた新しいin situハイブリダイゼーションと免疫組織化学

A new in situ hybridization and immunohistochemistry with a novel antibody to detect small T-antigen expressions of Merkel cell polyomavirus (MCPyV).

  • Michiko Matsushita
  • Daisuke Nonaka
  • Takeshi Iwasaki
  • Satoshi Kuwamoto
  • Ichiro Murakami
  • Masako Kato
  • Keiko Nagata
  • Yukisato Kitamura
  • Kazuhiko Hayashi
PMID: 24649978 PMCID: PMC3994555. DOI: 10.1186/1746-1596-9-65.

抄録

背景:

メルケル細胞がん（MCC）の約80％は、単クローン的にゲノムに統合され、予後に重要な意味を持つメルケル細胞ポリオマウイルス（MCPyV）を保有しています。MCPyVの有無は、通常、CM2B4免疫組織化学（IHC）を用いてMCPyV-large T抗原（LT）タンパク質を検出して診断される。しかし、この方法は誤診の危険性がある。

BACKGROUND: Approximately 80% of Merkel cell carcinomas (MCCs) harbor Merkel cell polyomavirus (MCPyV) which monoclonally integrates into the genome and has prognostic significance. The presence or absence of MCPyV is usually diagnosed using CM2B4 immunohistochemistry (IHC) for MCPyV-large T antigen (LT) protein. However, this method poses a risk of misdiagnosis.

方法:

本研究では、MCPyV-LT DNAのリアルタイムPCRを用いてMCCにおけるMCPyV感染を判定し、MCPyV-DNA陽性群と-陰性群の16例を作製した。MCPyV-small T抗原（MCPyV-ST）に対する従来のPCR、新規開発したMCPyV-STタンパク質（MCPyV-ST）に対するポリクローナル抗体（ST-1）を用いたIHC（aa：164～177）、in situ hybridization（ISH）、およびMCPyV-ST mRNAに対するリアルタイムPCRの診断感度と特異性をCM2B4-IHCと比較したところ、感度（0.94、15/16）、特異性（0.94、15/16）はそれぞれ0.94、0.94であった。

METHODS: In this study, we determined MCPyV infection in MCCs using real-time PCR for MCPyV-LT DNA and prepared 16 cases of MCPyV-DNA-positive and -negative groups. Diagnostic sensitivity and specificity of conventional PCR for MCPyV-small T antigen (MCPyV-ST), IHC using a newly developed polyclonal antibody (ST-1) for MCPyV-ST protein (MCPyV-ST) (aa: 164-177), and in situ hybridization (ISH) as well as real-time PCR for MCPyV-ST mRNA were compared against CM2B4-IHC for sensitivity (0.94, 15/16) and specificity (0.94, 15/16).

結果:

MCPyV-ST遺伝子の検査による感度と特異度は以下の通りである：MCPyV-STの従来のPCR（0.94、1.0）、ST-1-IHC（0.69、1.0）、ST mRNAのリアルタイムPCR（1.0、データなし）、ST mRNA ISH（0.94、1.0）。CM2B4-IHCを用いて評価したMCPyV偽陰性（1/16），偽陽性（1/16）の診断は，MCPyV-STまたはその発現の検査とMCPyV-LTのリアルタイムPCRにより正確に補正された．感度はCM2B4-IHC（0.94）がST-1-IHC（0.69）より優れていたが，ST mRNA-ISH（0.94）と同等であった．ST-1-IHC（1.0）、ST mRNA-ISH（1.0）の特異性はCM2B4-IHC（0.94）よりも優れていた。

RESULTS: The followings are the respective sensitivity and specificity results from examinations for MCPyV-ST gene: conventional PCR for the MCPyV-ST (0.94, 1.0), ST-1-IHC (0.69, 1.0), real-time PCR for ST mRNA (1.0, no data), ST mRNA ISH (0.94, 1.0). Each of the MCPyV-pseudonegative (1/16) and -pseudopositive (1/16) diagnoses evaluated using CM2B4-IHC were accurately corrected by examinations for MCPyV-ST or its expression as well as real-time PCR for MCPyV-LT. Sensitivity of CM2B4-IHC (0.94) was superior to that of ST-1-IHC (0.69) but equal to that of ST mRNA-ISH (0.94). Specificities of ST-1-IHC (1.0) and ST mRNA-ISH (1.0) were superior to that of CM2B4-IHC (0.94).

結論:

したがって、CM2B4-IHCと同様にST mRNA-ISHとST-IHCを併用することが推奨され、MCCにおけるMCPyV感染症の診断精度向上に寄与すると考えられる。

CONCLUSIONS: Therefore, combined application of ST mRNA-ISH and ST-IHC as well as CM2B4-IHC is recommended and will contribute to the diagnostic accuracy for MCPyV infection in MCCs.

バーチャルスライド:

この論文の仮想スライドは、ここに掲載されています: http://www.diagnosticpathology.diagnomx.eu/vs/9966295741144834。

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