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ビブリオコレラ菌プロテイナーゼの特徴：潜在的、ワクチン抗原候補
Characteristics of Vibrio cholerae proteinases: potential, candidate vaccine antigens.
PMID: 15297052 DOI: 10.1016/j.vaccine.2004.02.012.
抄録
ビブリオコレラ菌の細胞外プロテアーゼ（プロテアーゼ）は、細胞性コレラワクチンの抗原候補として研究されてきました。V. cholerae NCTC 10732 のプロテアーゼは、硫酸アンモニウム沈殿法と G100 Sephadex ゲルろ過法、または等電点集束法（IEF）のいずれかの方法でバッチ培養から調製した。プロテイナーゼ活性は24時間後に最大レベルに達したが、これは後期指数相と初期定常相に一致していた。活性の3つの主要なIEFピークは、17.2-195 EU ml(-1 )mg(-1)の範囲の比活性で分解された。これらの画分のドデシル硫酸ナトリウム-ポリアクリルアミドゲル電気泳動（SDS-PAGE）は、プロテアーゼ活性が実証可能な42、45、57および75 kDaのバンドを明らかにした。ペプチド消化分析により、各プロテイナーゼ画分の触媒特異性が異なることが示唆された。メタロプロテイナーゼおよびセリンプロテイナーゼ阻害剤、α(2)-マクログロブリン（α(2)-M）、チオールプロテイナーゼ阻害剤およびN-エチルマレイミドはプロテイナーゼを阻害した。これらのプロテイナーゼは、大腸菌のヒートラビルトキシンをニックネームして触媒活性の高いサブユニットを産生した。これらのV. colerae抗原の細胞ワクチンへの応用の可能性について検討した。
Vibrio cholerae extracellular proteinases (proteases) have been studied as potential candidate antigens for acellular cholera vaccines. Proteinases from V. cholerae NCTC 10732 were prepared from batch culture either by ammonium sulphate precipitation and G100 Sephadex gel filtration or by isoelectric focusing (IEF). Proteinase activity was at a maximum level after 24 h, coincident with the late exponential phase and early stationary phase. Three major IEF peaks of activity were resolved with specific activities in the range 17.2-195 EU ml(-1 )mg(-1). Sodium dodecyl sulphate-polyacrylamide gel electrophoreses (SDS-PAGE) of these fractions revealed 42, 45, 57 and 75 kDa bands in which proteinase activity was demonstrable. Peptide digest analysis suggested different catalytic specificities for each proteinase fraction. Metalloproteinase and serine proteinase inhibitors, alpha(2)-macroglobulin (alpha(2)-M), the thiol proteinase inhibitor and N-ethylmaleimide inhibited the proteinases. The proteinases nicked Escherichia coli heat-labile toxin to yield catalytically active sub-units, confirmed by the measurement of intrinsic ADP-ribosylation activity. The possible value of these putative V. cholerae antigens in an acellular vaccine is discussed.