シャクヤクの全グルコシドはTh1およびTh17応答を抑制することによりシェーグレン症候群を緩和する

Total glucosides of paeony alleviates Sjogren's syndrome by inhibiting Th1 and Th17 responses.

抄録

背景:

シェーグレン症候群（SS）は、外分泌腺への免疫細胞の浸潤によって区別され、その進行にはTヘルパー（Th）細胞が重要な役割を果たしている。漢方薬Paeonia lactiflora Pallの主成分である芍薬グルコシド（TGP）は、SSを含む多くの自己免疫疾患を治療することができる。

BACKGROUND: Sjogren's syndrome (SS) is distinguished by immune cells infiltration of exocrine glands, with T helper (Th) cells playing a crucial role in its progression. Total glucosides of paeony (TGP), the main compounds of Chinese medicine Paeonia lactiflora Pall, can treat many autoimmune diseases including SS.

目的:

SSモデルにおけるTh1細胞およびTh17細胞の分化と機能性に対するTGPの影響と機序を探索し、この疾患に対する潜在的な治療戦略に関する新たな知見を得ること。

PURPOSE: To explore the impact and mechanism of TGP on differentiation and functionality of Th1 and Th17 cells in the SS model, and to provide novel insights into potential therapeutic strategies for this condition.

研究デザイン:

非肥満性糖尿病（NOD）マウスおよびマウスの脾臓ナイーブCD4T細胞を用いて、TGP投与によるTh1およびTh17の関連分子を検出し、Th細胞の分化を通じてTGPがSSに影響を与えるメカニズムを解明した。

STUDY DESIGN: Non-Obese Diabetic (NOD) mice and spleenic naive CD4T cells of mice were employed to detect the relevant molecules of Th1 and Th17 with TGP administration to elucidate the mechanism by which TGP affected SS through Th cell differentiation.

方法:

NODマウスにTGP（720、360mg/kg）、ヒドロキシクロロキン（HCQ、80mg/kg）、ペオニフロリン（PF、300mg/kg）をそれぞれ16週間胃内投与した。In vitroでは、マウスの脾臓から採取したナイーブCD4T細胞をTGP（60、30μg/ml）およびPF（25μg/ml）と3日間インキュベートした。唾液流量、涙流量、顎下腺（SMG）および涙腺（LG）の病理学的変化を測定した。フローサイトメトリーにより、末梢血CD4T細胞とナイーブCD4T細胞におけるTh1、Th17、制御性T細胞（Treg）の割合をそれぞれ同定した。さらに、SMG、LGおよび脾臓ナイーブCD4T細胞におけるTh1およびTh17に関連する因子の発現レベルを、RT-qPCR、ELISA、免疫組織化学染色、ウェスタンブロッティングを用いて解析した。

METHODS: NOD mice were intragastrically administered with TGP (720, 360 mg/kg), Hydroxychloroquine (HCQ, 80 mg/kg), and Paeoniflorin (PF, 300 mg/kg) for 16 weeks, respectively. In vitro, naive CD4T cells from spleen of mice were incubated with TGP (60, 30 μg/ml) and PF (25 μg/ml) for 3 days. The measurements were conducted on saliva flow, tear flow, as well as the pathology of submandibular glands (SMG) and lacrimal glands (LG). Flow cytometry was utilized to identify the percentage of Th1, Th17, and regulatory T cells (Treg) in peripheral blood CD4T cells and naive CD4T cells, respectively. Furthermore, the expression levels of factors related to Th1 and Th17 in SMG, LG and spleenic naive CD4T cells were analyzed using RT-qPCR, ELISA, immunohistochemical staining as well as Western blotting.

結果:

ビヒクルを投与したNODマウスと比較して、TGP投与は涙と唾液の流量を増加させ、SMGとLGの病理学的損傷を改善し、Th1とTh17リンパ球の割合を低下させ、mRNAとタンパク質レベルの両方でSMGとLGにおけるTh1とTh17細胞関連因子の発現を抑制した。さらに、TGPは、Th1およびTh17関連因子のmRNAおよびタンパク質発現を抑制することにより、ナイーブCD4T細胞がTh1およびTh17サブセットに分化するのを阻止し、細胞培養上清中のIFN-γおよびIL-17Aを含むエフェクターサイトカインの減少をもたらした。

RESULTS: In comparison to NOD mice administered with vehicle, TGP treatment enhanced tear and saliva flow, ameliorated pathological damage in SMG and LG, down-regulated the percentages of Th1 and Th17 lymphocytes, and suppressed the expression of Th1 and Th17 cell-related factors in SMG and LG at both mRNA and protein levels. Moreover, TGP could prevent naive CD4T cells from differentiating into Th1 and Th17 subsets by suppressing the mRNA and protein expression of Th1 and Th17 related factors, leading to a reduction of effector cytokines including IFN-γ and IL-17A in the cell culture supernatant.

結論:

TGPはTh1およびTh17細胞の分化と機能を抑制し、SS症状の改善を促進する。

CONCLUSION: TGP inhibits differentiation and function of Th1 and Th17 cells, which facilitates the amelioration of SS symptoms.