カベオリン-1のノックダウンは、血管内皮成長因子誘導血管新生を阻害することにより、SMMC7721ヒト肝細胞癌細胞の浸潤性を低下させる

Caveolin-1 Knockdown Decreases SMMC7721 Human Hepatocellular Carcinoma Cell Invasiveness by Inhibiting Vascular Endothelial Growth Factor-Induced Angiogenesis.

• Zhi-Bo Zhang
• Zheng Shi
• Lan-Fang Yang
• Hong-Bin Gao

抄録

背景:

最近、いくつかの研究で、カベオリン-1 の過剰発現が肝細胞癌（HCC）のアポトーシス抵抗性、血管新生、浸潤性に関与していることが示されている。しかし、カベオリン-1が媒介する腫瘍進行のメカニズムは不明なままである。.レンチウイルスベクターを用いてカベオリン-1小干渉RNA（siRNA）発現細胞を構築した。SMMC7721細胞中の分泌されたVEGFレベルを酵素結合免疫吸着アッセイ（ELISA）で評価した。SMMC7721細胞の増殖、細胞周期、アポトーシスおよび浸潤性は、それぞれMTT、フローサイトメトリー、アネキシンV-FITC/PIおよび浸潤アッセイにより検出された。SMMC7721細胞上清を用いて培養したヒト臍帯静脈内皮細胞（HUVECs）のPhospho-eNOSレベルをウエスタンブロットで分析した。caveolin-1 siRNAを発現するSMMC7721細胞の上清で処理したHUVECsにおける内皮管構造形成を分析するために、毛細管様管形成アッセイを実施した。ヌードマウスにおけるSMMC7721の移植および増殖が観察された。血管新生は免疫組織化学的血管新生アッセイにより解析した。

Background: Recently, several studies have demonstrated that caveolin-1 overexpression is involved in apoptosis resistance, angiogenesis, and invasiveness in hepatocellular carcinoma (HCC). However, the mechanisms underlying caveolin-1-mediated tumor progression remain unclear. . Lentiviral vectors were used to construct caveolin-1 small interfering RNA- (siRNA-) expressing cells. Secreted VEGF levels in SMMC7721 cells were evaluated by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). SMMC7721 cell proliferation, cycle, apoptosis, and invasiveness were detected by MTT, flow cytometry, Annexin V-FITC/PI, and invasion assay, respectively. Phospho-eNOS levels in human umbilical vein endothelial cells (HUVECs) cocultured with SMMC7721 cell supernatants were analyzed by Western blot. Capillary-like tubule formation assay was performed to analyze endothelial tubular structure formation in HUVECs treated with supernatants from caveolin-1 siRNA-expressing SMMC7721 cells. SMMC7721 implantation and growth in nude mice were observed. Angiogenesis was analyzed by immunohistochemical angiogenesis assay.

結果:

カベオリン-1 siRNAを発現したSMMC7721細胞はVEGFの分泌量を減少させた。カベオリン-1 RNAiはまた、SMMC7721細胞の増殖と細胞周期の進行を阻害し、アポトーシスの増加を伴った。カベオリン-1 siRNAを発現したSMMC7721細胞からの上清は、HUVECにおいて細胞周期の進行を阻害し、phospho-eNOSレベルを低下させた。カベオリン-1 siRNAを発現させたSMMC7721細胞の上清で処理したHUVECでは、内皮管構造形成が大幅に減少した。また、カベオリン-1 siRNA を発現させた SMMC7721 細胞では、腫瘍性や血管新生誘導が減少した。

Results: Caveolin-1 siRNA-expressing SMMC7721 cells secreted reduced levels of VEGF. Caveolin-1 RNAi also caused an inhibition of SMMC7721 cell proliferation and cell cycle progression that was accompanied by increased apoptosis. Supernatants from caveolin-1 siRNA-expressing SMMC7721 cells inhibited cell cycle progression and decreased phospho-eNOS levels in HUVECs. Endothelial tubular structure formation in HUVECs treated with supernatants from caveolin-1 siRNA-expressing SMMC7721 cells was considerably reduced. Caveolin-1 siRNA-expressing SMMC7721 cells also showed reduced tumorigenicity and angiogenesis induction .

結論:

本研究では、カベオリン-1がVEGF誘導血管新生を協調させてヒトHCC細胞の浸潤性を正に制御するという新しいメカニズムを明らかにした。

Conclusion: Our results reveal a novel mechanism, whereby caveolin-1 positively regulates human HCC cell invasiveness by coordinating VEGF-induced angiogenesis.

Copyright © 2020 Zhi-Bo Zhang et al.