ビタミンD3は、E2F3を標的としたmiR-15a-5pによる肝がん細胞増殖抑制作用を有している

Vitamin D3 mediates miR-15a-5p inhibition of liver cancer cell proliferation via targeting E2F3.

• Yulong Li
• Qiang Lin
• Su'E Chang
• Rong Zhang
• Jingjie Wang

抄録

ビタミンD3は肝臓がんの発生や進行を抑制することが示されているが、そのメカニズムは明らかになっていない。本研究では、ビタミンD3とmicroRNA（miR）-15a-5pの肝がん細胞への影響を、MTTおよびコロニー形成アッセイ、フローサイトメトリー、ウエスタンブロッティング、逆転写定量PCRを用いて検討した。E2F転写因子3（E2F3）がmiR-15a-5pの標的であるかどうかについては、デュアルルシフェラーゼレポーターアッセイを行った。肝がん細胞におけるE2F3遺伝子発現をサイレンシングする効果を、小型干渉RNAを用いて調べた。ビタミンD3は肝がん細胞の増殖を抑制し、アポトーシスを誘導し、miR-15a-5pの発現を増加させた。また、miR-15a-5pミミックを投与することで、肝がん細胞の増殖が対照群と比較して有意に抑制された。バイオインフォマティクス解析とデュアルルシフェラーゼレポーターアッセイにより、E2F3がmiR-15a-5pの標的であり、E2F3をサイレンシングすることで肝がん細胞の増殖が抑制されることが示された。このことから、ビタミンD3はmiR-15a-5pを介したE2F3遺伝子発現のサイレンシングにより細胞増殖を抑制することが示唆された。以上の結果から、ビタミンD3とE2F3を標的とした新規肝癌治療薬の可能性が示唆された。

Vitamin D3 has been demonstrated to suppress the development and progression of liver cancer, but the mechanism is unclear. The effects of vitamin D3 and microRNA (miR)-15a-5p on liver cancer cells were investigated in the present study using MTT and colony formation assays, flow cytometry, western blotting and reverse transcription-quantitative PCR. A dual-luciferase reporter assay was performed to determine whether E2F transcription factor 3 (E2F3) was a target of miR-15a-5p. The effects of silencing the E2F3 gene expression in liver cancer cells were investigated using a small interfering RNA. Vitamin D3 suppressed liver cancer cell proliferation, induced apoptosis and increased miR-15a-5p expression. Treatment with the miR-15a-5p mimics significantly suppressed liver cancer cell proliferation compared with that of the controls. Bioinformatics analysis and a dual-luciferase reporter assay demonstrated that E2F3 was a target of miR-15a-5p and that silencing E2F3 inhibited liver cancer cell proliferation. Therefore, Vitamin D3 suppressed cell proliferation by miR-15a-5p-mediated silencing of E2F3 gene expression. These findings suggested a role for vitamin D3 and E2F3 targeting as potential novel liver cancer therapies.

Copyright: © Li et al.